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應用不同組裝的磷脂酰膽堿對牛精漿蛋白的隔離——摘要、簡介
來源：上海謂載 瀏覽 2264 次 發(fā)布時間:2021-10-20
摘要
精子結(jié)合劑(BSP)蛋白質(zhì)是牛精漿中的主要蛋白質(zhì)，已知部分嵌入精子膜的外葉并與含膽堿的脂質(zhì)結(jié)合存在于其中。這種插入對冷凍保存后的精液質(zhì)量產(chǎn)生負面影響通過誘導精子的早期獲能。表面特性假設BSP蛋白質(zhì)通過張力測量來檢查：BSP蛋白質(zhì)具有高度的表面活性。這個表明BSP蛋白不僅可以通過相互作用到達被磷脂覆蓋的界面兩者之間也是由于它們自身的表面活性。BSP蛋白的插入精子的脂質(zhì)域外葉是在仿生系統(tǒng)（如朗繆爾）上復制的單層。BSP蛋白的插入可以在含有膽堿脂質(zhì)的可壓縮流體域中進行。單層膜也用于研究BSP蛋白的復合由兩個磷脂組裝體：來自蛋黃或脂質(zhì)體的低密度脂蛋白(LDL)來自卵磷脂。不考慮磷脂結(jié)構（脂蛋白或脂質(zhì)體），BSP是阻礙改變膜的結(jié)構。只有BSP蛋白：磷脂酰膽堿的總體比例很重要。兩種螯合劑的區(qū)別在于它們的表面特性：LDL有很強的與外層融合的趨勢，而脂質(zhì)體主要留在外層相同的時間尺度。
一、簡介
精子蛋白結(jié)合劑(BSP)是一個已知的蛋白質(zhì)家族在輸卵管精子儲存庫的形成中發(fā)揮作用在精子獲能中，這是受精必不可少的精子成熟步驟[1,2]。在牛精漿中，三個專業(yè)以10:1:1的比例[3]對BSP蛋白進行鑒定和分類根據(jù)Manjunath等人的命名法確定。[2]：BSP1[4]，BSP3[5]和BSP5[6,7]，分別。他們的表觀質(zhì)量BSP1和BSP3為15–16.5 kDa，BSP5為28–30 kDa[6,8]。這三種蛋白質(zhì)由一個獨特的N端結(jié)構域組成然后是兩個纖連蛋白II型結(jié)構域。只有N端三種BSP蛋白的結(jié)構域差異很大[4-6]。每個纖連蛋白II型結(jié)構域包含一個磷酸膽堿結(jié)合站點[9-14]。最后那些對于生物的生物學作用是必不可少的BSP蛋白質(zhì)。事實上，精子膜的外葉在射精過程中與含有BSP蛋白的精漿接觸[2,15]。BSP蛋白快速結(jié)合含膽堿的磷脂，如磷脂酰膽堿和存在于精子膜上的鞘磷脂[9,12,16-19]和通過部分插入精子的外部來覆蓋精子的表面精子質(zhì)膜的小葉[1,13,20]。這是第一個形成輸卵管精子儲存的關鍵步驟水庫和精子獲能之后。BSP蛋白既可溶又可插入疏水膜的事實爭論BSP蛋白質(zhì)的兩親性特征。因此，該本研究的第一部分旨在通過進行張力測量來檢驗這一假設。
BSP蛋白誘導的早期獲能[21,22]具有冷凍保存后對精液質(zhì)量的負面影響失去抗寒性和抗凍性[12,17,23-25]。
因此，保護者的存在對于維持精子質(zhì)量。蛋黃被廣泛用于隔離BSP蛋白[17,26-32]。這種隔離是由于特定的和強大的外層磷脂酰膽堿之間的相互作用蛋黃中存在低密度脂蛋白(LDL)，以及BSP蛋白[9,12,33,34]。在某些情況下，精子的保護還假設對抗LDL的早期獲能由富含LDL的極性脂質(zhì)之間的交換產(chǎn)生磷脂和精子膜中的脂質(zhì)減少和膽固醇由于外流[29]。其他磷脂，如大豆卵磷脂目前被用作磷脂的替代品蛋黃。然而，在這種情況下，之間可能的相互作用脂質(zhì)體和膜是未知的。因此，第二部分本研究的目的是比較低密度脂蛋白和脂質(zhì)體與脂質(zhì)膜接觸。為此，一空氣-緩沖液界面的單層脂質(zhì)用于模擬精子膜外葉的脂質(zhì)結(jié)構域。這個方法被證明是有效的復制異質(zhì)牛外葉脂質(zhì)域的域精子膜[35]。最后一個由主要脂質(zhì)成分，即鞘磷脂、膽固醇、1-palmitoyl-2-docosahexaenoyl-sn-glycero-3-phosphocholine(PC)和縮醛磷脂1-(1Z-octadecenyl)-2-docosahexaenoyl-snglycero-3-phosphocholine(P-PC)。在這個單層中，膽固醇和鞘磷脂將自身結(jié)構化為縮合結(jié)構域被PC和P-PC的液體混合物包圍，溫度為34°C。低密度脂蛋白和脂質(zhì)體被引入單層下方的亞相在接近與生物膜相關的壓力下[36]。添加劑和單層之間的相互作用是通過監(jiān)測表面積的變化來檢測。最后，該低密度脂蛋白和脂質(zhì)體對BSP蛋白的螯合特性在相同的脂質(zhì)模型外小葉上進行了比較。精子膜和在相同的條件下。