一、官方標(biāo)準(zhǔn)體積參數(shù)

1.標(biāo)準(zhǔn)DynePlate專(zhuān)用96孔板

Kibron Delta?8配套一次性DynePlate聚丙烯微孔板，儀器標(biāo)稱(chēng)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量體積50?μL/孔，為儀器出廠標(biāo)定、方法開(kāi)發(fā)、CMC測(cè)定、高通量篩選的推薦終體積。該體積經(jīng)過(guò)探針浸入深度、液面高度算法匹配，保證DyneProbe八通道探針可以正確浸入液面，獲得可靠表面張力讀數(shù)。

2.允許浮動(dòng)區(qū)間

實(shí)際實(shí)驗(yàn)可浮動(dòng)范圍40?60?μL每孔。

低于40?μL，液面高度不足，探針無(wú)法可靠浸入，容易出現(xiàn)測(cè)值丟失、數(shù)據(jù)跳變、報(bào)探針未接觸液面。

高于60?μL，液面過(guò)高，探針浸入過(guò)深，容易發(fā)生孔間液體交叉沾染；振動(dòng)或者板位移動(dòng)時(shí)液體容易濺出，同時(shí)會(huì)改變探針受力，帶來(lái)系統(tǒng)偏移。不允許超過(guò)60?μL。

二、不同實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景體積選擇

1.常規(guī)高通量篩選、CMC測(cè)定、濃度梯度實(shí)驗(yàn)

優(yōu)先固定50?μL每孔。梯度稀釋直接在板內(nèi)完成，定容至50?μL，保證所有孔體積完全一致，消除液面高度帶來(lái)的系統(tǒng)誤差。加樣完成后使用透明封板膜封板，減少溶劑揮發(fā)；上機(jī)前小心撕掉封板膜，避免膜碎屑掉入孔內(nèi)。

2.含易揮發(fā)溶劑、長(zhǎng)時(shí)間靜置動(dòng)力學(xué)測(cè)試

優(yōu)先選用55?60?μL，補(bǔ)償揮發(fā)損耗。不建議大于60?μL。同時(shí)縮短板放置到上機(jī)的等待時(shí)間，減少體積變化帶來(lái)的偏差。

3.高粘度、易起泡樣品

控制在45?50?μL。體積偏大容易產(chǎn)生氣泡，氣泡會(huì)直接破壞測(cè)量，出現(xiàn)大量無(wú)效數(shù)據(jù)。加樣時(shí)沿孔壁緩慢加入，避免沖擊產(chǎn)生氣泡。出現(xiàn)氣泡的孔需要棄掉重新配制。

三、操作關(guān)鍵注意事項(xiàng)

1.整板所有孔盡量保持體積一致，同一塊板最大體積差不超過(guò)±5?μL。孔與孔體積差異會(huì)帶來(lái)液面高度不一致，八通道探針浸入深度相對(duì)改變，造成行與行之間系統(tǒng)偏差。

2.不可以使用普通商用96孔板隨意替換DynePlate板。普通96孔板孔底高度、孔深度不一樣，即使加入50?μL液體，實(shí)際液面高度和原裝DynePlate板不一致，會(huì)導(dǎo)致探針浸入異常。

3.邊緣孔揮發(fā)效應(yīng)明顯，即便體積加樣準(zhǔn)確，長(zhǎng)時(shí)間放置后邊緣孔實(shí)際體積會(huì)下降，建議加樣后盡快上機(jī)；需要孵育時(shí)務(wù)必封板。

4.移液槍需要校準(zhǔn)，低體積移液建議使用多通道移液槍?zhuān)瑴p少每孔加樣體積離散。

四、體積異常帶來(lái)的典型故障現(xiàn)象

體積過(guò)低：大量孔數(shù)據(jù)缺失、探針接觸報(bào)警、表面張力數(shù)值整體偏高，平行樣RSD顯著變大。

體積過(guò)高：孔間串液、液體濺到板表面、測(cè)值系統(tǒng)性偏低，出現(xiàn)無(wú)規(guī)律異常點(diǎn)。

孔間體積不均：同一板內(nèi)相同樣品，不同行讀數(shù)出現(xiàn)系統(tǒng)性偏移。